1 этап. Материал (не позднее 1-2 часов с момента забора) засевают на 5% кровяной агар, культивируют в эксикаторе со свечой (СО 42 0) 20-24 часа при температуре 37 5о 0С.

2 этап. Отбирают подозрительные колонии, дающие 7 a 0-гемолиз (иногда определяют их количество), микроскопируют (окраска по Граму, на капсулу), отсевают в сывороточный бульон.

3 этап. Определяют чистоту культуры (окраска по Граму).

Идентификацию проводят по морфологическим, серологическим (р. агглютинации на стекле с поливалентной противокапсульной сывороткой), культуральным, биологическим свойствам. Последние проводят путем посева в среду с оптохином (нет роста), в 10% желчный бульон (лизис), внутрибрюшинного заражения мышей (гибель). При необходимости (например, при пневмонии) доказывают этиологическую значимость пневмококка. Определяют также чувствительность к антибиотикам. Культуральный метод является ведущим методом диагностики, так как он - ранний, точный, чувствительный, позволяет выбрать адекватное этиотропное лечение.

III. Серологический метод - определение противокапсульных антител и их динамики в сыворотке крови с помощью РНИФ (с аутоштаммами), РСК и РПГА (с эталонными штаммами пневмококка). Чаще используют при хронических формах инфекции. Применение метода ограничивается более поздними сроками получения результата и отсутствием готовых диагностикумов.

IV. Биологический метод - внутрибрюшинное заражение белых мышей исследуемым материалом (чаще мокротой). Погибших мышей вскрывают, делают мазки-отпечатки, посевы крови и органов на кровяной агар с последующей идентификацией возбудителя. Метод вспомогательный, ограничивается трудоемкостью, наличием в материале других видов микроорганизмов, патогенных для мышей, низкой чувствительностью мышей к некоторым сероварам пневмококка.

ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ,

ВЫЗВАННЫХ МИКРОБАМИ СЕМЕЙСТВА ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

К ним относятся: эшерихиозы, вызванные условно-патогенными и патогенными (энтеропатогенными, энтерогеморагическими, энтероинвазивными и энтеротоксигенными) кишечными палочками, брюшной тиф, паратифы А и Б, сальмонеллезы, дизентерия, кишечные клебсиеллезы и кишечные иерсиниозы.

Методы их микробиологической диагностики включают следующие принципы:

1. Микроскопический метод диагностики, как правило, не приемлем, так как патогенные и непатогенные энтеробактерии имеют общие морфологические характеристики.

2. Для диагностики применяют бактериологический и серологический методы. Выбор метода диагностики зависит от клинических проявлений, места локализации возбудителя и фазы патогенеза болезни. Так, например, при брюшном тифе самым ранним методом диагностики является бактериологическое выделение возбудителя из крови - гемокультура, что соответствует этапу патогенеза - «бактериемия» (первая неделя клинических проявлений болезни). Начиная со второй недели, в организме человека формируется гуморальный иммунный ответ, поэтому в эти сроки возможна диагностика, основанная на обнаружении антител (постановка реакции агглютинации по Видалю, РПГА, латекс агглютинации). Начиная с третьей недели заболевания возбудитель вновь оказывается в кишечнике и может быть обнаружен бактериологически в испражнениях больного - «метод копрокультуры». Начиная с 6-8 недели болезни, а также в период реконвалесценции, для диагностики бактерионосительства следует использовать как бактериологическое, так и серологическое исследования: многократное исследование копрокультуры, холеркультуры, иногда миелокультура и обнаружение Ви-антител в сыворотке или копрофильтратах.