· Особенности клеточной стенки грамположительных бактерий.

Мощная, толстая, несложно организованная клеточная стенка, в составе которой преобладают пептидогликан и тейхоевые кислоты, нет липополисахаридов (ЛПС), часто нет диаминопимелиновой кислоты.

· Особенности клеточной стенки грамотрицательных бактерий.

Клеточная стенка значительно тоньше, чем у грамположительных бактерий, содержит ЛПС, липопротеины, фосфолипиды, диаминопимелиновую кислоту. Устроена более сложно- имеется внешняя мембрана, поэтому клеточная стенка трехслойная.

Некоторые бактерии снабжены жгутиками и ворсинками. Ряд бактерий образуют споры.

Исследование микробов в окрашенном состоянии. Простые и сложные методы окраски бактерий. Описать принцип окраски бактерий по Граму. Перечислить грамположительные и грамотрицательные группы микроорганизмов.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис­пользуя красители анилинового ряда (основные или кис­лые). Если красящий ион — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромо­фор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кис­лые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Ос­новные красители — генциановый фиолетовый, кристал­лический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят на­сыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спирто­вые, которые и служат для окрашивания микробных кле­ток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Ес­ли мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изуче­ния структуры клетки и дифференциации микроорганиз­мов. Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону (дифференциация кислотоустойчивых бактерий), Бури-Гинсу (выявление капсул), по Ожешко (выявление спор), Нейссеру (выявление зерен волютина).

Окраска по Граму.

Принцип метода: Основной краситель связывается с пептидогликаном, которого много в клетке грамположительных бактерий. Раствор Люголя, содержащий йод, фиксирует комплекс. После обработки диффузным веществом и водой генцианвиолет, плохо связавшийся в стенке грамотрицательных бактерий, выходит, и они окрашиваются дополнительным красителем.

Окраска капсул по Бурри-Гинсу,

Принцип метода: Основной краситель изначально окрашивает все микроорганизмы. После обработки кислотой краситель удерживают только кислотоустойчивые бактерии. Кислотонеустойчивые бактерии окрашиваются дополнительным красителем.

Окраска спор по Ожешко.

Принцип метода: Волютин связывается с метиленовым синим, образуя нерастворимое вещество. Цитоплазма окрашивается дополнительным красителем в желтый цвет.

Окраска по Романовскому-Гимзе

Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.

Принцип метода: Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный