Раздел 1. Общая часть
Методы микроскопии (люминесцентная, темнопольная, фазово-контрастная, электронная).
Устройство светового микроскопа: окуляр, тубус, тубусодержатель, макровинт, микровинт, подставка, объектив, зеркало, конденсор, ирисовая диафрагма и светофильтр, предметный столик, револьверное устройство, корпус коллекторной линзы.
Разрешающая сила – минимальное расстояние между двумя точками, при котором они еще видны раздельно.
1) Светлопольная микроскопия используется для изучения окрашенных объектов в фиксированных препаратах.
2) Иммерсионная микроскопия. Объектив такого микроскопа рассчитан на наличие жидкости между линзой и препаратом. Это позволяет увеличить светосилу объектива.
3) Люминесцентная микроскопия основана на способности некоторых веществ люминисцировать, т.е. светить при УФ или синем свете. Люминисцентный микроскоп отличается от светового наличием мощного источника света в осветителе и системы светофильтров.
4) Темнопольная микроскопия. Микроскопия в темном поле зрения основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с помощью конденсора, у которого центральная часть затемнена, и прямые лучи от осветителя не попадают в объектив. Им заменяют обычный конденсор в световом микроскопе.
5) Фазово-контрастная микроскопия. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объекта на темном фоне. Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп с объективами со специальными фазовыми пластинками, а также специальные осветители.
6) Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, микромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов.
Основные принципы систематики бактерий. Таксономические категории, применяемые в микробиологии. Определение понятия «вид», его критерии как основной таксономической единицы. Характеристика подвида, (биовар, серовар, хемовар, фаговар), чистой культуры, популяции, штамма, клона.
Исследование микробов в окрашенном состоянии. Простые и сложные методы окраски бактерий. Описать принцип окраски бактерий по Граму. Перечислить грамположительные и грамотрицательные группы микроорганизмов.
При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.
Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону (дифференциация кислотоустойчивых бактерий), Бури-Гинсу (выявление капсул), по Ожешко (выявление спор), Нейссеру (выявление зерен волютина).
Окраска по Граму.
| Этап | Вещество | Время |
| Окраска основным красителем | Генцианвиолет | 1 минута |
| Фиксация | Раствор Люголя | 1 минута |
| Обработка диффузным веществом | 96% этиловый спирт | 5-10 секунд |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
| Окраска дополнительным красителем | Водный фуксин | 1 минута |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
Принцип метода: Основной краситель связывается с пептидогликаном, которого много в клетке грамположительных бактерий. Раствор Люголя, содержащий йод, фиксирует комплекс. После обработки диффузным веществом и водой генцианвиолет, плохо связавшийся в стенке грамотрицательных бактерий, выходит, и они окрашиваются дополнительным красителем.
Окраска капсул по Бурри-Гинсу,
| Этап | Вещество | Время |
| Негативное контрастирование | Чёрная тушь | 1 минута |
| Фиксация | Пламя горелки | 1 минута |
| Окраска по Гинсу | Водный фуксин | 1 минута |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
| Принцип метода: Тушь окрашивает капсулы, а краситель - цитоплазму. | ||
| Окраска кислотоустойчивых бактерий по Циль-Нильсену. | ||
| Этап | Вещество | Время |
| Окраска основным красителем | Карболовый фуксин Циля | 3-5 минут при нагревании |
| Обработка диффузным веществом | Раствор серной кислоты | 1-2 минуты |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
| Окраска дополнительным красителем | Метиленовый синий | 3-5 минут |
| Промывка | Вода | 5-10секунд |
Принцип метода: Основной краситель изначально окрашивает все микроорганизмы. После обработки кислотой краситель удерживают только кислотоустойчивые бактерии. Кислотонеустойчивые бактерии окрашиваются дополнительным красителем.
Окраска спор по Ожешко.
| Этап | Вещество | Время |
| Протравливание | Раствор соляной кислоты | 2-3 минуты при нагревании |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
| Фиксация | Пламя спиртовки | 5-10 секунд |
| Окраска основным красителем | Карболовый фуксин Циля | 2-3 минуты при нагревании |
| Обработка диффузным веществом | Раствор серной кислоты | 1-2 минуты |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
| Окраска дополнительным красителем | Метиленовый синий | 1 минута |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
| Принцип метода: Соляная кислота разрыхляет споры и делает возможным их окраску. Вегетативные формы окрашиваются дополнительным красителем. Окраска включений волютина по Нейссеру. | ||
| Этап | Вещество | Время |
| Окраска основным красителем | Уксуснокислый метиленовый синий Нейссера | 1 минута |
| Обработка диффузным веществом | Вода | 5-10 секунд |
| Окраска дополнительным красителем | Везувин | 1 минута |
| Промывка | Вода | 5-10 секунд |
Принцип метода: Волютин связывается с метиленовым синим, образуя нерастворимое вещество. Цитоплазма окрашивается дополнительным красителем в желтый цвет.
Окраска по Романовскому-Гимзе
Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором (1 мл готовой жидкой краски + 2 мл основного буферного раствора + 47 мл дистиллированной воды) в течение 40—120 мин (продолжительность окрашивания подбирают эмпирически). Пользуются фосфатным буфером. Ополаскивают в дистиллированной воде, высушивают и исследуют при иммерсии.
Принцип метода: Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток — в голубой, ядра — в красный
Основные принципы культивирования бактерий. Искусственные питательные среды, их классификация. Требования, предъявляемые к питательным средам.
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных условиях.
По консистенции
1. жидкие
2. полужидкие
3. плотные
Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5—2% агара, полужидкие — 0,3— 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт переработки особого вида морских водорослей, он плавится при температуре 80°С, затвердевает при температуре около 40 °С и в застывшем состоянии придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют желатин (10—15%). Ряд естественных питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами по себе являются плотными.
По исходным компонентам
1. Натуральные
2. Синтетические
По составу
1. Простые
2. Сложные
По целевому назначению
1. основные
2. элективные
3. дифференциально-диагностические.
4. Консервирующие
К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Это гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую и плотную среду. Такие среды служат основой для приготовления сложных питательных сред.
Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида из материалов, содержащих разнообразную постороннюю микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от большинства других. Например, среда Плоскирева является селективной для шигелл и сальмонелл, ЖСА – для S.aureus.
Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для разграничения отдельных видов микроорганизмов. Принцип построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора ферментов. Например, на среде Эндо шигеллы и сальмонеллы образуют бесцветные колонии, а кишечные палочки и другие разлагающие лактозу – малиново-красные.
Консервирующие – предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.
Вакцины. Определение. Классификация. Требования, предъявляемые к вакцинным препаратам. Живые вакцины. Получение, применение: достоинства и недостатки
Живые вакцины представляют собой мутанты, то есть вакцинные штаммы микроорганизмов с остаточной вирулентностью, не способные вызывать специфические заболевания, но сохранившие способность размножаться и находиться в организме, приводя к развитию бессимптомной вакцинной инфекции. Вакцинные штаммы для приготовления живых вакцин были получены различными путями: методом отбора (селекции)мутантов с ослабленной вирулентностью, методом экспериментального направленного изменения вирулентных свойств озбудителя, длительным пассированием в организме животных, методом генетического скрещивания (получения рекомбинантов). В последние годы был применен еще один метод для получения вакцинных штаммов, основанный на использовании генетических скрещиваний, результатом которых являются рекомбинанты со сниженной вирулентностью. Так был получен акцинный штамм вируса гриппа А при взаимодействии авирулентного исходного штамма (содержащего гемагглютинин Н? и нейраминидазу N2) и вирулентного штамма Гонконг H3N2). Рекомбинант содержал гемагглютинин Н3 вирулентного вируса Гонконг и сохранил авирулентность исходного вакцинного штамма.Живые вакцины имеют целый ряд преимуществ в сравнении с другими видами вакцин, и связано это свойство с тем, что пребывание и размножение в организме человека и животных аттенуированных вакцинных штаммов приводит к развитию вакцинной инфекции (специфического инфекционного заболевания без выраженных клинических симптомов).Вакцинная инфекция, проявляясь ли в виде местного воспалительного процесса или сопровождаемая общей реакцией организма, всегда влечет за собой перестройку иммунобиологических свойств организма и выражается в выработке специфического иммунитета. Живые вакцины, как правило, вводятся однократно и более простыми способами (перорально, интраназально, накожно, реже подкожно). Способность вакцинного штамма размножаться и присутствие в организме постоянного антигенного раздражителя обеспечивает напряженный, прочный и довольно длительный иммунитет.К вакцинным штаммам предъявляются следующие основные требования:а) наличие остаточной вирулентности;б) достаточная иммуногенность;в) отсутствие возможности реверсии к исходным свойствам.Таким образом, вакцинные штаммы должны обладать стойкими, наследственно закрепленными аттенуированными свойствами. Для сохранения жизнеспособности и стабильности свойств
большинство живых вакцин выпускают в сухом виде, что достигается методом лиофилизации — высушивание из-за мороженного состояния под глубоким вакуумом. Сухие вакцины могут сохраняться в течение года и более при температуре холодильника (не выше 4°—8°С).
Роль медицинской микробиологии в осуществлении профилактики инфекционных заболеваний. Основные группы иммунобиологических препаратов, применяемых для профилактики и терапии инфекционных заболеваний. Препараты для диагностики инфекционных заболеваний.
Морфология.
| Стрептококки | |
| Признак | Примечание |
| Форма | круглая |
| Окраска | Темно-фиолетовая |
| Взаимное расположение | В виде цепочек |
| Капсула | есть |
| Жгутики | нет |
| споры | нет |
На кровяном агаре α- дают частичный гемолиз и позеленение среды, β – полностью гемолизируют агар, γ вызывают визуально невидимый гемолиз. Основными возбудителями болезней человека являются β – гемолитические виды
Антигены. 1) Капсульный, 2)Белок М(суперантиген)-типоспецифический для стрептококков группы А, 3)Пептидогликаны-фактор адгезии - для стрептококков группы А, 4)Эритрогенные токсины.
Вирулентность.
Лабораторная диагностика. Материал для исследования: гной, слизь из зева и носа, моча и др. - подвергают бактериоскопическому исследованию. Для этого готовят мазки, которые окрашивают по Граму. Бактериологическое исследование проводят путем посева исследуемого материала на чашки Петри с кровяным агаром. Выросшие колонии характеризуют по наличию или отсутствию гемолиза. Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам в реакции преципитации с полисахаридным преципитиногеном, выделенным из исследуемой культуры, и антисыворотками к серотипам А, В, D. При подозрении на сепсис делают посевы крови. Серологическое исследование проводят для подтверждения диагноза ревматизма. С этой целью определяют наличие антител к О-стрептолизину в РСК или реакции преципитации, а также С-реактивного белка. В последние годы для диагностики стрептококковых инфекций используют ПЦР.
ВИРУС ЭПСТАЙНА-БАРР (ВЭБ) HHV -4
ВЭБ вызывает инфекционный мононуклеоз, а также лимфопролиферативные болезни. Инфекционный мононуклеоз протекает с интоксикацией, поражением нёбных и глоточных миндалин, увеличением лимфатических узлов, печени, селезенки, изменениями в крови.
ВЭБ относится к роду Lymphocryptovirus, семейству Herpesviridae.
Структура. Другое название вируса Эпштейна-Барр – герпесвирус человека тип 4. Геном - линейная двухцеп.ДНК, заключен.в капсид с икосаэдрическим типом симметрии и окружен внешней оболочкой, содержащей гликопротеиды Вирус имеет ядерные антигены – nuclear antigens (EBNAs) 1, 2, ЗА, ЗВ, 3C; латентные протеины (LPs), латентные мембранные протеины (LMPs) 1, 2 и две маленькие Эпстайна-Барр-кодируемые РНК (EBER)-молекулы – EBER-1 и EBER-2.
Факторы патогенности EBNAs и LPs являются ДНК-связывающими белками, считающимися основными для развития инфекции (EBNA-1), иммортализации (EBNA-2) и других целей. LMPs – латентные мембранные белки (LMP-1, 2) с онкогенноподобным действием.
Эпидемиология. Антитела к вирусу имеются у большинства населения. Источник -больной человек или вирусоноситель. Путь воздушно-капельный, контактный через слюну.
Патогенез. После первичного размножения в эпителии носоглотки ВЭБ взаимодействует с молекулой CD21 В-лимфоцита и, проникнув в клетку, вызывает размножение В-лимфоцитов, персистирует в них. Особенно много инфицированных В-лимфоцитов находится в нёбных миндалинах. ВЭБ обусловливает латентную инфекцию в лимфоидной ткани, эпителиальных клетках рта и глотки, слюнных желез. Он вызывает бессимптомную, хроническую или острую инфекцию (в виде инфекционного мононуклеоза), а также лимфопролиферативные болезни.
Клиническая картина. Инфекционный мононуклеоз характеризуется высокой лихорадкой, недомоганием, лимфаденопатией, фарингитом
Особенности инфекции:
· Широкая распространенность среди всех групп населения
· Пожизненная персистенция вируса в орагнизме;
· Существование бессимптомных форм заболевания
· Отсутствие дифференциальной симптоматики
Иммунитет клеточный Повторные заболевания не описаны.
Диагностика. Для инфекционного мононуклеоза характерны наличие атипичных лимфоцитов, лимфоцитоз (моноциты составляют 60-70 % белых кровяных клеток с 30 % атипичных лимфоцитов). Ранее применяли вспомогательные реакции, выявляющие гетерофильные антитела (агглютинация эритроцитов барана сывороткой крови больного и др.).
Свежая ВЭБ-инфекция выявляется в ИФА по различным показателям: появляются IgM-антитела к вирусному капсидному антигену (VCA), повышается титр EBNA и др. Затем при развитии клинических проявлений повышается уровень IgG-антител к VCA.
Характеристика возбудителя легионеллёза: название по-латыни, особенности его экологии. Источники и пути передачи возбудителя, формы инфекции. Микробиологическая диагностика легионеллёза, его лечение и профилактика.
Легионеллез представляет собой тяжелое инфекционное заболевание, характеризующееся общей интоксикацией, поражением дыхательной, мочевыделительной и центральной нервной системы.
Характеристика возбудителя
Возбудитель инфекции – подвижные грамотрицательные анаэробы рода Legionella. Для человека опасность представляют 22 из известных 40 видов легионелл. Бактерии выделяют эндотоксин, а также сильнодействующий экзотоксин.
Резервуаром и источником инфекции являются пресноводные водоемы (преимущественно со стоящей водой) и почва. Легионеллы активно размножаются в простейших (к примеру, амебах) при температуре 35-40 °С, защищаясь от воздействия химических дезинфицирующих средств, хлора.
Человек не является источником инфекции, даже близкий контакт с больным не приводит к заражению легионеллезомЛегионеллез распространяется по аэрозольному механизму, заражение происходит при вдыхании воздушно-водяной взвеси, содержащей бактерии.
Заражение в лечебно-профилактических учреждениях может происходить при прохождении различных процедур: вихревые ванны, использование ультразвуковых дезинтеграторов, интубация и т. п.
У людей отмечается высокая восприимчивость к инфекции, ее развитию способствует курение и злоупотребление алкоголем, а также многие хронические заболевания: иммунодефицитные состояния, болезни легких и обменные нарушения.
Инкубационный период разнится в зависимости от клинической формы инфекции, в целом может составлять 2 до 10 дней. Его средняя продолжительность – 4-7 дней.
В большинстве случаев легионеллез протекает в виде тяжелой пневмонии (именно ее называют «болезнью легионеров»). У некоторых больных отмечается продромальный период – имеет место головная боль, слабость, ухудшение аппетита, иногда диарея. В остальных случаях заболевание начинается остро, с резкого подъема температуры тела до высоких цифр и нарастания интоксикации (озноб, головные боли, миалгии и артралгии, потливость). Вскоре интоксикация затрагивает ЦНС, отмечается заторможенность, эмоциональная неустойчивость, бред, галлюцинации, обмороки, нарушение сознания. Могут отмечаться нейродисфункции – параличи глазодвигательной мускулатуры, нистагм, дизартрия и атаксия. На 3-4 день заболевания обнаруживается кашель, первоначально сухой, в последующем - с отделением скудной слизисто-гнойной (иногда кровянистой) мокроты. Характерна одышка, боль в груди (в особенности в случае присоединения фиброзного плеврита).
Диагностика легионеллеза
Возбудителя выделяют путем бакпосева из мокроты, плевральной жидкости, смывов с бронхов, отмечают в крови.
Наиболее специфичным и точным диагностическим методом является бактериологическое исследование, РИФ и ИФА. Кроме того, антитела к легионеллам могут выявляться с помощью РНИФ и РМА. В острый период заболевания возможно выделение антигена возбудителя с помощью ИФА и ПЦР.
Лечение легионеллеза
Этиотропное лечение легионеллеза заключается в назначении антибиотиков группы макролидов (эритромицин). В остальном комплекс терапевтических мероприятия направлен на снижение общей интоксикации, коррекцию дыхательной недостаточности, отслеживание и лечение нарушений в работе органов и систем..
Профилактика легионеллеза
Профилактика легионеллеза заключается в контроле над состоянием систем кондиционирования и вентиляции, ванных комнат и душевых кабин, аппаратов для медицинских процедур.
Морфология
| Стрептококки | |
| Признак | Примечание |
| Форма | Палочковидная с закругленными концами |
| Окраска | красная |
| Взаимное расположение | Короткими цепочками |
| Капсула | есть |
| споры | нет |
| Жгутики/пили | Есть/есть |
Бактерии более крупные и длинные при выращивании при 22—25 °С и короткие кокковидные — при 37 °С. Бактерии подвижны только при температуре до 25°С. Культуральные свойства Аэробы, но растут в анаэробных условиях. Оптимальна слабощелочная реакция среды (рН 7,2—7,4), но растут и при (рН 6,6—6,0). Оптимальна для роста температура от 22 до 26 °С. Не прихотливы к питательным веществам. Растут слабощелочных и элективных. На среде Эндо через 24—48 ч при температуре 22—25 °С вырастают мелкие блестящие неокрашенные или слегка розоватые колонии
Антигены.
О - соматический антиген, определяющий антиген-ную характеристику вида, серогруппы и серовара. Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica и другие представители этого рода имеют антигенную структуру, характерную для каждого вида. Y. pseudotuberculosis имеют жгутиковый (Н), соматический (O)S- и R-антигены и антигены вирулентности - Y и W. Патогенность.
Плазмида, несущие гены вирулентности, ответственные за адгезию , цитотоксичноть и агрегацию тромбоцитов.
47. Возбудители ротавирусных гастроэнтеритов. Таксономия, характеристика возбудителя. Микробиологическая диагностика
Ф-ры патогенности:
· ферменты:Эндопептидаза,Нейраминидаза,Фосфолипаза,ДНК-аза,РНК-аза
· Микрокапсула (препятствует фагоцитозу)
· Адгезины(проникновение)
· Токсины(Эритротоксин),Гемолизины(через индукцию образования акт.форм.О2)®разруш.эритроцитов
Антигены: антигенный полиморфизм. Среди антигенов выделяют белки — адгезины, фосфо — и гликолипиды, полисахаридные компоненты.
Диагностика: материал: Мокрота, отделяемое носоглотки, зева, уретры, влагалища
· Бактериоскопические -Окраска по Романовскому- Гимзе
· Бактериологич –посев (среды с экстрактами органов,дрожжевым)
· Серологические – ИФА,РИФ,РНГА,РСК(в сыворотке ищем АТ, в остальном материале –АГ)
· Генетические-ПЦР
Респираторный микоплазмоз- M . pneumoniae - пораж.ВДП и глубоких отделов дых.тракта.
Эпидемиология: Источник: больные в остром периоде или носители,бессимптомно перенесшие болезнь. Путь-воздушно-капельный. Слабая контагиозность, высокая частота бессимптомных форм.
Патогенез и клиника: Возбудитель пораж.клетки реснитчатого эпителия ®разные типы протекания: фарингит,трахеобронхит, пневмония. Лихорадочный период длится до 4 нед с умерен.интоксикацией(часто забол.переносят «на ногах»), возможна дессиминация в суставы, костн.мозг,мозг.оболочки, возникновение иммунопатол.процессов.
Урогенитальные микоплазмозы - M . hominis , M . genitalium , U . Urealiticum
Эпидемиология: Источник-Зараж.человек. Путь –половой, возможен вертикальный путь, а так же инфицирование плода во время родов.
Патогенез и клиника: Вход.ворота-слизистая урогенитального тракта. Поражаются уретра,влагалище и др.органы мочепол.с-мы.
Диагностика: соскобы, моча., а дальше по схеме(см.выше) Т к микоплазмы обнаруживаются у 5-15%здор.людей, принято считать, что микоплазмы причастны к развитию воспалит.процесса. если их титр в исследуемых пробах >104КОЕ/мл
Лечение: антибиотики:макролида,тетрациклины,фторхиноны
Профилактика: нетнетнет!!!
Раздел 1. Общая часть
Таксономия и систематика микроорганизмов.
Систематика микроорганизмов.
Систематика- распределение микроорганизмов в соответствии с их происхождением и биологическим сходством. Систематика занимается всесторонним описанием видов организмов, выяснением степени родственных отношений между ними и объединением их в различные по уровню родства классификационные единицы- таксоны. Основные вопросы, решаемые при систематике (три аспекта, три кита систематики)- классификация, идентификация и номенклатура.
Классификация- распределение (объединение) организмов в соответствии с их общими свойствами (сходными генотипическими и фентипическими признаками) по различным таксонам.
Таксономия- наука о методах и принципах распределения (классификации) организмов в соответствии с их иерархией. Наиболее часто используют следующие таксономические единицы (таксоны)- штамм, вид, род. Последующие более крупные таксоны- семейство, порядок, класс.
В современном представлении вид в микробиологии- совокупность микроорганизмов, имеющих общее эволюционное происхождение, близкий генотип (высокую степень генетической гомологии, как правило более 60%) и максимально близкие фенотипические характеристики.
Нумерическая (численная) таксономия основывается на использовании максимального количества сопоставляемых признаков и математическом учете степени соответствия. Больщое число сравниваемых фенотипических признаков и принцип их равной значимости затрудняло классификацию.
2. При изучении, идентификации и классификации микроорганизмов чаще всего изучают следующие (гено- и фенотипические) характеристики:
1.Морфологические- форма, величина, особенности взаиморасположения, структура.
2.Тинкториальные- отношение к различным красителям (характер окрашивания), прежде всего к окраске по Граму. По этому признаку все микроорганизмы делят на грамположительные и грамотрицательные.
Морфологические свойства и отношение к окраску по Граму позволяют как правило отнести изучаемый микроорганизм к крупным таксонам- семейству, роду.
3.Культуральные- характер роста микроорганизма на питательных средах.
4.Биохимические- способность ферментировать различные субстраты (углеводы, белки и аминокислоты и др.), образовывать в процессе жизнедеятельности различные биохимические продукты за счет активности различных ферментных систем и особенностей обмена веществ.
5.Антигенные- зависят преимущественно от химического состава и строения клеточной стенки, наличия жгутиков, капсулы, распознаются по способности макроорганизма (хозяина) вырабатывать антитела и другие формы иммунного ответа, выявляются в иммунологических реакциях.
6.Физиологические- способы углеводного (аутотрофы, гетеротрофы), азотного (аминоавтотрофы, аминогетеротрофы) и других видов питания, тип дыхания (аэробы, микроаэрофилы, факультативные анаэробы, строгие анаэробы).
7.Подвижность и типы движения.
8.Способность к спорообразованию, характер спор.
9.Чувствительность к бактериофагам, фаготипирование.
10.Химический состав клеточных стенок- основные сахара и аминокислоты, липидный и жинокислотный состав.
11.Белковый спектр (полипептидный профиль).
12.Чувствительность к антибиотикам и другим лекарственным препаратам.
13.Генотипические (использование методов геносистематики).
В последние десятилетия для классификации микроорганизмов, помимо их фенотипических характеристик (см. пп.1- 12), все более широко и эффективно используются различные генетические методы (изучение генотипа- генотипических свойств). Используются все более совершенные методы- рестрикционный анализ, ДНК- ДНК гибридизация, ПЦР, сиквенс и др. В основе большинства методов лежит принцип определения степени гомологии генетического материала (ДНК, РНК). При этом чаще исходят из условного допущения, что степень гомологии более 60% ( для некоторых групп микроорганизмов- 80%) свидетельствует о принадлежности микроорганизмов к одному виду (различные генотипы - один геновид), 40- 60%- к одному роду.
Идентификация.
Основные фено- и генотипические характеристики, используемые для классификации микроорганизмов, используются и для идентификации, т.е. установления их таксономического положения и прежде всего видовой принадлежности- наиболее важного аспекта микробиологической диагностики инфекционных заболеваний. Идентификация осуществляется на основе изучения фено- и генотипических характеристик изучаемого инфекционного агента и сравнения их с характеристиками известных видов. При этой работе часто применяют эталонные штаммы микроорганизмов, стандартные антигены и иммунные сыворотки к известным прототипным микроорганизмам. У патогенных микроорганизмов чаще изучают морфологические, тинкториальные, культуральные, биохимические и антигенные свойства.
Номенклатура- название микроорганизмов в соответствии с международными правилами. Для обозначения видов бактерий используют бинарную латинскую номенклатуру род/вид, состоящую из названия рода (пишется с заглавной буквы) и вида (со строчной буквы). Примеры- Shigella flexneri, Rickettsia sibirica.
В микробиологии часто используется и ряд других терминов для характеристики микроорганизмов.
Штамм- любой конкретный образец (изолят) данного вида. Штаммы одного вида, различающиеся по антигенным характеристикам, называют серотипами (серовариантами- сокращенно сероварами), по чувствительности к специфическим фагам- фаготипами, биохимическим свойствам- хемоварами, по биологическим свойствам- биоварами и т.д.
Колония- видимая изолированная структура при размножении бактерий на плотных питательных средах, может развиваться из одной или нескольких родительских клеток. Если колония развилась из одной родительской клетки, то потомство называется клон.
3. Культура- вся совокупность микроорганизмов одного вида, выросших на плотной или жидкой питательной среде.
4. Основной принцип бактериологической работы- выделение и изучение свойств только чистых (однородных, без примеси посторонней микрофлоры) культур.
Дата: 2019-02-19, просмотров: 272.
