Принцип метода. Лецитин извлекается из сыворотки крови горячим спиртом; после минерализации в экстракте колориметрическим методом определяется неорганический фосфор, содержащийся в составе лецитинов. Количество лецитина определяется по стандартной кривой.

Клинико-диагностическое значение определение содержания лецитина в сыворотке крови. Содержание лецитина в сыворотке крови здорового человека зависит от возраста, составляя в среднем 1,5-2,7 г/л. Изменение содержания лецитина в крови наблюдается при ряде заболеваний (атеросклероз, сахарный диабет, микседема и др.).
7. Определение протеолитичсской активности аланинаминотрансферазы.

 8.0пределснис активности аспартатаминогрансферазы. Колориметрический метод определения активности аспартат- и аланинаминотрансфераз в сыворотке крови.

       Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови имеет важное значение для диагностики болезней печени. Для острого гепатита характерно раннее повышение активности аланинаминотрансферазы (АлАТ). При инфаркте миокарда в 95 % случаев в сыворотке крови повышается активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ). В сыворотке крови здоровых людей активность АсАТ колеблется в пределах 0,028-0,139 мкмоль/л×сек, активность АлАТ – 0,028-0,196 мкмоль/л×сек.

Принцип метода. В результате переаминирования при участии АсАТ и АлАТ образуются, соответственно, щавелевоуксусная (ЩУК, оксалоацетат) и пировиноградная (ПВК) кислоты.

СООН         СООН                   СООН                                  СООН

 |                    |                                 |                             |

СН–NH₂ + C=O                      C=O   + СН–NH₂

 |                    |            ←→    |                                      |

CH₂                       (CH₂)₂                                         АсАТ CH₂                      (CH₂)₂

 |                    |                              |                         |

COOH          COOH                  COOH               COOH

аспартат  α-кетоглутарат      оксалоацетат     глутамат 

СООН         СООН                   СООН                                  СООН

 |                    |                                 |                             |

СН–NH₂ + C=O                      C=O   + СН–NH₂

 |                    |            ←→    |                                      |

CH₃                       (CH₂)₂                                         АлАТ CH₃                      (CH₂)₂

                      |                                                             |

                     COOH                                                  COOH

аланин    α-кетоглутарат       пируват              глутамат 

Оксалоацетат при декарбоксилировании превращается в пируват. При добавлении кислого 2,4-динитрофенилгидразина ферментативный процесс останавливается и образуется гидразон пировиноградной кислоты. Последний в щелочной среде дает окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоты.

Техника выполнения работы.

Определение АсАТ.

Одновременно готовят опытную и контрольную пробы.

Опытная проба. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора, добавляют 0,1 мл сыворотки, помещают в термостат при температуре 37° С на 1 час. Затем добавляют 0,5 мл раствора динитрофенилгидразина и выдерживают при комнатной температуре 20 мин для развития реакции. Затем приливают 5 мл 0,4 н NaOH, тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 10 мин для развития окраски. Оптическую плотность измеряют на ФЭКе с зеленым светофильтром в кювете на 10 мм против контроля.

Контрольная проба. Содержит все ингредиенты опытной пробы за исключением сыворотки крови. Вместо нее берут 0,1 мл дистиллированной воды и инкубируют в тех же условиях, что и опытную.

Определение АлАТ.

Одновременно готовят опытную и контрольную пробы.

В опытную пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора для определения АлАТ, затем добавляют 0,1 мл испытуемой сыворотки и помещают в термостат при температуре 37° С на 30 мин. Дальнейший ход анализа такой же, как при определении АсАТ.

В контрольную пробирку вместо сыворотки крови берут 0,1 мл дистиллированной воды.

Расчет активности ферментов производят по калибровочному графику, отражающему зависимость оптической плотности от содержания ПВК.

9. Количественное определение остаточного азота крови.

Принцип определения: в результате сжигания безбелкового фильтрата крови азот низкомолекулярных азотистых соединений переходит в состав иона NH4. Количество азота устанавливается по количеству кислоты, необходимой для связывания образовавшегося аммония.

В норме азот остаточный составляет 20— 40 мг%. Увеличение содержания азота остаточного в крови наступает при нарушении функции почек, печени, при усиленном распаде тканей (гангрена, туберкулез, злокачественные опухоли).
10. Количественное определение мочевины в сыворотке крови и моче. Количественное определение мочевины в моче по Рашковану.

Принцип метода. Основан на том, что мочевина с гипохлоритом натрия и фенолом образует продукт зеленого окрашивания.

Принцип в крови

Мочевина под действием уреазы разлагается на углекислый газ и аммиак, который в щелочной среде с гипохлоритом натрия и фенолом образует индофенол синего цвета (метод Бертло). Светопоглощение образовавшегося продукта пропорционально содержанию мочевины в образце.

11. Количественное определение креатинина в сыворотке крови и моче.