1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры: производится количественный посев материала несколько раз с промежутками в 5-7 дней. Если кандиды обнаруживаются многократно в количестве 10 53 0 на г. исследуемого материала и более, то диагноз кандидомикоза подтверждается.

3. Серологический метод: используется РСК и РА (диагностический титр антител 1:160) и РПГА (1:1600). Ставят также РП с белковыми и полисахаридными антигенами кандид.

4. Аллергический метод (кожные пробы по типу реакции Манту).

5. Выделенная культура проверяется на вирулентность на белых мышах. Если доза до 1 млн. клеток кандид вызывает гибель мыши, культура считается вирулентной.

Лабораторная диагностика глубоких микозов.

А. Криптококкоз:

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры.

3. Серологическая диагностика (РА, РП, РСК, РПГА). Эти реакции редко бывают положительными.

4. Выявление криптококкового антигена в крови и ликворе больных с помощью РП.

5. Заражение белых мышей.

Б. Кокцидиоидоз:

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры.

3. Серологическая диагностика:

с 2 недель до 4 месяцев выявляют антитела в РП,

с 4 месяцев и позже ставят РСК (диагностические титры 1:4 - 1:32).

4. Кожные пробы с кокцидиоидином (в разведении 1:100 и 1:1000). Проба положительная, если через 24-48 часов эритема больше 0,5 см.

В. Гистоплазмоз:

1. Микроскопия патологического материала.

2. Выделение чистой культуры.

3. Серологическая диагностика: первые три месяца в РСК и РП выявляются анти-h-антитела (это острый процесс). Позже 3 месяцев в РСК и РА выявляют анти-m-антитела (хронический процесс).

4. Кожная проба с гистоплазмином.

ВОЗБУДИТЕЛИ МАДУРОМИКОЗА

Мадуромикоз (мадурская стопа) - хроническое гранулематозное заболевание, вызываемое актиномицетами (Actinomyces, Nocardia) или грибами (Aspergillus, Madurella). Встречается преимущественно в тропических и субтропических странах. Возбудители проникают в организм из почвы через микротравмы кожи. Процесс локализуется в стопе, реже - в кисти. Болезнь начинается с появления мелких плотных узелков (гранулем), которые в последующем сливаются в один очаг с вовлечением в воспаление кожи, подкожной клетчатки, сухожилий, костей. Гранулематозный очаг распадается с образованием гноя, который через многочисленные свищи вытекает наружу. Наряду с распадом ткани происходит разрастание фиброзной ткани. Пораженная стопа увеличивается в размерах, деформируются, приобретая вид «медвежьей лапы». Болезнь нередко осложняется присоединением гноеродной инфекции. Самостоятельное выздоровление наблюдается редко. Материалом для микробиологического исследования является гной, кусочки биопсированной ткани. В материале отыскивают друзы - бесцветные или пигментированные зерна, из них готовят мазки, как при актиномикозе. Мицелий грибов по сравнению с мицелием актиномицетов толстый (2-5 мкм), ветвистый, септированный, содержит много хламидоспор, друзы пигментированы. Мицелий актиномицетов тонкий (0,5-2,0 мкм), несептированный, ветвящийся. Центр друзы состоит из поли- и мононуклеарных клеток и войлокообразного скопления мицелия, от которого на периферию отходят гифы с реактивно-утолщенными концами («дубинки»). Выделение и идентификация возбудителя проводится, как при актиномикозах и грибковых поражениях кожи. Чистые культуры грибов выделяют на среде Сабуро, пивном сусло-агаре. Выращивание проводят в аэробных и анаэробных условиях, при температурах 20 - 25⁰ С и 37⁰ С. Одновременно материал исследуют на гноеродные бактерии.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ПНЕВМОЦИСТОЗА

Пневмоцистоз - заболевание, вызываемое пневмоцистами (Pneumocystis carinii). Одноядерные трофозоиты имеют форму неправильной дольки и варьируют в размерах от 1 до 5 мкм; содержат митохондрии, эндоплазматический ретикулум, различные гранулы и вакуоли. Они размножаются бинарным делением. Более крупные трофозоиты окружаются толстой стенкой, в результате чего формируется циста. В ней происходит деление ядра и цитоплазмы трофозоита с образованием от 2 до 8 клеток (спорозоитов). Диаметр цисты около 10 мкм; когда ее стенка разрывается, спорозоиты выходят и начинается новый цикл размножения трофозоитов.

Пневмоцисты обитают в альвеолах легких здоровых людей (1-10%), прикрепляясь к альвеолярному эпителию. При пневмоцистозе поражаются межальвеолярные перегородки с развитием хронической интерстициальной пневмонии. Альвеолы и бронхиолы, заполняются пенистой массой, в результате чего нарушается газообмен и наступает кислородная недостаточность. Развивается картина хронической пневмонии. Развитие заболевания связано с недостаточностью иммунной системы, что объясняет наиболее частое поражение грудных, особенно недоношенных и ослабленных детей (чаще в закрытых детских коллективах). Возможно длительное носительство. Пневмоцистоз у взрослых осложняет иммунодефицитные состояния (туберкулез, опухоли, СПИД).

Пневмоцистоз - инфекция дыхательных путей с воздушно-капельным механизмом передачи.

Материалом для диагностики служит слизь, полученная методом ларингоскопии, либо катетером, либо при глубоком откашливании (после предварительной ингаляции водяного пара). Материал берут не ранее 2-ой недели болезни. При летальном исходе изучают гистологические среды и мазки-отпечатки легких. Основной метод диагностики - микроскопический. Препараты окрашивают по Романовскому-Гимзе. Наиболее типично обнаружение восьмиядерных цист паразита. Пневмоцисты приобретают фиолетовый цвет, ядра - темно-синий. Препараты можно обрабатывать также люминесцентной сывороткой.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ДОНОВАНОЗА

Это - хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся гранулематозными изъязвлениями кожи и подкожной клетчатки в области половых органов и промежности.

Возбудитель открыт Донованом в 1905 г. и назван Calymmatobacterium granulomatosis. Он имеет палочковидную форму с закругленными концами, полиморфен, неподвижен, длина - 1-2 мкм. Типичным для возбудителя является наличие капсулы и расположение внутри фагоцитов. В связи с одиночным, либо биполярным скоплением хроматина палочка приобретает вид «английской булавки».

Для культивирования микроба используют яичные среды, асцит-агар, среду Сабуро, на которых вырастают влажные, прозрачные, блестящие колонии. Можно для выращивания использовать куриные эмбрионы.

Клинические формы. Чаще всего встречается так называемая язвенная форма. Заболевание начинается исподволь и незаметно. Длительность инкубационного времени не определена, чаще - от нескольких дней до нескольких месяцев. На месте входных работ (в области половых органов) появляется папула с диаметром в 5 - 7 см. Папула превращается в язву с мягкими неровными краями. Язвы безболезненны, ярко-розового цвета. Дно язвы имеет зернистую поверхность, иногда видна пленка. Отделяемый экссудат имеет зловонный запах. В результате возможной аутоинфекции могут возникнуть вторичные язвы (на руках, лице). Появляются признаки интоксикации. Возможно метастазирование в печень, селезенку, кости.

Кроме описанной могут быть и другие формы. В частности, при некротической, самой тяжелой форме, наблюдается некроз и гнойный распад тканей с возможным разрушением половых органов.

Эпидемиология. Донованозом болеет только человек, чаще женщины. Заболевание встречается в местах с тропическим климатом, повсеместно, передается половым путем и лишь изредка - бытовым.

Лабораторная диагностика проводится в основном бактериоскопическим методом. Из отделяемого язв готовят мазки, окрашивают по методу Романовского-Гимзе и микроскопируют.

ВОЗБУДИТЕЛЬ ЯЗВЫ БУРУЛИ

Это хронические кожные язвы, наблюдаемые в странах с тропическим и субтропическим климатом. Заболевание впервые описано в Африке, встречается также в странах Азии, Юго-Восточной Азии, США, относительно высокие показатели заболеваемости в Нигерии и Новой Гвинее. Название болезни связано с округом Бурули (Уганда, Африка), где в 1960 году зарегестрированы случаи указанного поражения.

Возбудителем болезни является микроб рода Mycobacterium - Mycobacterium ulcerans. Это - палочки до 2-3 мкм в длину, грамположительные, неподвижные, без спор и капсул. Важным свойством является кислотоустойчивость микроба и расположение его в препарате группами, иногда до 100 особей в группе. Возбудитель растет на средах, используемых для культивирования микобактерий туберкулеза (чаще яичные среды). Для роста необходима температура 33⁰ С, длительность роста - 7 суток. Рост в виде мелких, влажных, бледно-розового цвета колоний.

Заболевание начинается с появления уплотнений чаще на разгибательной поверхности предплечья и голени. В результате распада уплотнений в центре образуются язвы. Язвы чаще одиночные. Края язвы уплотнены и имеют неправильные очертания, глубина язв до 10-15 см. Выделяется сероватый экссудат. Патологоанатомически - некроз колладермы и подкожной клетчатки, обнаруживаются гигантские многоядерные клетки. Исход болезни не однозначный: самопроизвольное излечение, присоединение вторичной инфекции, развитие деформаций и контрактур, требующих хирургического лечения. Основной метод лечения - антибиотикотерапия.

Лабораторная диагностика проводится с использованием бактериоскопического и бактериологического метода. Материал для исследования забирают кюреткой, иногда требуется глубокая биопсия. Из полученного материала готовят препараты с окраской по Циль-Нильсену. Тот же материал засевают на специальные вышеуказанные питательные среды, выделяют чистую культуру с последующей идентификацией.

ВОЗБУДИТЕЛЬ МЕЛИОИДОЗА

Мелиоидоз - эпидемическое особо опасное инфекционное заболевание животных и человека, которое протекает в форме острой или хронической септицемии и сопровождается образованием абсцессов в различных органах и тканях.

Возбудитель - Pseudomonas pseudomallei, грамотрицательная палочка, окрашивается биполярно, размеры 0,5-1x2-6 мкм, подвижны. В материале от больных иногда видно слизистое образование вокруг микробов (ложная капсула). Хемоорганотроф, факультативный анаэроб, нетребователен к питательным средам. Хорошо растет в МПБ и на МПА с добавлением 5% глицерина, при температуре 37⁰ С, рН - 6,8. На агаре может формировать колонии 3-х типов - S, R и М (слизистые), в последующем появляется коричневый пигмент. На МПБ - вначале равномерная муть, потом тонкая пленка, в последующем - толстая, морщинистая пленка. Культуры издают запах плесени, эвкалипта, трюфелей. Сбраживает углеводы до кислоты без газа, выражены протеолитические свойства (разжижает желатин и свернутую сыворотку). Индол и сероводород не образует, обладает выраженными гемолитическими свойствами.

Содержит жгутиковый (Н), соматический (О), оболочечный (К) и слизистый (М) антигены. Содержит эндотоксин (дает эритему в месте введения), 2 термолабильных экзотоксина (летальный фактор и геморрагически-некротический.

Возбудитель проникает в организм через поврежденную кожу и слизистые желудочно-кишечного тракта и верхний дыхательных путей, затем проникает в лимфатические узлы, оттуда в кровь и внутренние органы, в которых образуются гранулемы, в центре гранулемы - некроз.

Лабораторная диагностика

Материал: кровь, моча, мокрота, отделяемое язв и абсцессов, отделяемое глаз, носа, рвотные массы, испражнения, вода и др. Способы забора, упаковки, доставки в лабораторию исследуемого материала такие же как и с другими особо опасными микробами 1-й группы.

Бактериоскопический метод. Готовят мазки из материала и окрашивают по Граму. Подозрительными являются грамотрицательные биполярно окрашенные палочки. Специфичен иммунофлуоресцентный метод обработки и микроскопии препарата.

Бактериологический метод (основной). Посев крови производят в 5% глицериновый бульон с последующим выделением чистой культуры.

Остальной материал обрабатывают пенициллином и засевают на 5% глицериновый МПА с кристаллвиолетом. Выросшие через 1-2 суток колонии пересевают для накопления чистой культуры на скошенный агар и изучают характер роста, подвижность, наличие пигмента, биохимические свойства и антигенную структуру (характеристика дана выше).

Биологический метод. Используют одновременно с бактериологическим. Чувствительные животные - морские свинки и золотистые хомячки. Методы заражения разные - внутрибрюшинно, накожно (через скарифицированную кожу), подкожно, в нос, на конъюнктиву глаза. Наблюдают гибель животных, обязательное поражение лимфатических узлов и внутренних органов (очага некроза). Готовят и микроскопируют мазки-отпечатки.

Серологический метод. Имеет вспомогательное значение. С сывороткой крови больного ставят РА (диагностический титр 1:640), РСК (диагностический титр 1:20), РПГА, которые недостаточно специфичны. Более надежно определить динамику нарастания титра антител.