Использование половых клеток семенников (спермии и сперматогонии)
Поможем в ✍️ написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

 

Сперматозоиды являются природным вектором, доставляющим ДНК в клетку. Использование спермиев в качестве переносчиков одной ДНК рассматривается как один из перспективных методов генетической модификации животных. В опытах Lavitrano (1989) 30% мышей полученных после оплодотворения обработанной ДНК спермой, оказались трансгенными и передавали трансген по наследству.

Многочисленные попытки в других лабораториях неуспешными. Анализ 1300 мышей, родившихся in vitro обработанной ДНК спермой, не выявил трансген ни у одной из исследованных особей [Brinster, 1989), Недавнее исследования показали, что при применении метода переноса ДНК посредством сперматазоидов в одной и той же лаборатории дае пра использовании одинаковой схемы исследований могут быть получены противоречивые результаты [Maiore et al, 1998]. Это позволяет предположить, что встраивание ДНК происходит только на определенной стадии клеточного цикла. Однако до настоящего времени не установлен механизм интеграции экзогенной ДНК в геном сперматозоидов.

Huguet и Esponda [1998] исследовали способность сперматозоидов поглощать линейную ДНК in vitro и in vivo. В опытах in vitro отмытые придатковые сперматозоиды инкубировали 2 часа с линейной ДНК. ДНК инъецировали в проксимальную область семенных канальцев, после чего через 6 часов извлекали сперматозоиды. Присутствие чужеродной ДНК было показано у 60-70% сперматозоидов. Сперматозоиды способны поглощать ДНК, аккумулировать ее в ядре. Секркты придатков и семенных канальцев не блокируют этот процесс.

Для повышения эффективности связывания ДНК со сперматозоидами используют различные методы: ДНК-липосомные комплексы [Bachiller et al.. 1991], инъекцию в семенники [Sato et al.. 1994], непосредственную инъекцию в семенные канальцы [Kim et al.. 1997] и придатки [Huguet и Esponda, 1998], инъекцию в семенные канальцы с последующей электропорацией [Yamazaki et al.. 1998], ко-инъекцию головок спермиев и ДНК в ооциты [Perry et al. 1999]. Также было показано, что экзогенная ДНК может быть эффективно доставлена в ооциты микроинъецированными сперматозоидами.

Большое внимание в последнее время привлекают манипуляции со стволовыми клетками семенников-сперматогониями [Brinster, Nagano. 1998]. Была продемонстрирована возможность переноса сперматогониев от одного самца другому как у животных одного вида (Avarbock, 1994; Brinster и Zimmermann. 1994), так и между двумя видами.

После пересадки половых клеток из семенников самца мыши в семенники другого самца, до 80% потомства происходило из сперматозоидов самца-донора. Была доказана возможность успешного протекания сперматогенеза после пересадки криоконсервированных клеток семенника и после их длительного консервирования.пересадке в семенники мышей клеток из семенников поздних стадий сперматогенеза половых клеток доноров выявлено не было /Dobnnski et al., 1999].

Успешное длительное культивирование половых клеток животных in uru делает возможным проведение трансформации сперматогониев экзогенной ДНК с последующей селекцией. Nagano с соавторами /2000] сообщили об успешном введении экзогенной ДНК в сперматогонии т vitro и in vivo посредством ретровирусной системы доставки. Экспрессия ретровирусной генной конструкции, включающей lacZ, наблюдалась в семенниках более 6 месяцев. Анализ показал, что по крайней мере 1 из 300 стволовых клеток семенников содержали трансген.

В сочетании с пересадкой трансформированных половых клеток в семенники реципиентов и успешным протеканием сперматогенеза подход может быть использован для получения трансгенного потомства.

Не смотря на хорошие результаты в использовании сперматозоидов для получения трансгенных мышей, а так же отдельные успешные попытки получения трансгенных свиней и КРС [Gandolfl et al, 1989, Schelander et al, 1995, Sperandio et al, 1996], каких-либо значительных успехов в получении трансгенных сельскохозяйственных животных с помощью трансформированных сперматогониев и спермиев до настоящего времени достигнуто не было. Достижения в использовании трансгенных технологий.

 

Год Событие Автор
1971 Доставка чужеродной ДНК в ооциты кролика сперматозоидами Bracket
1974 Получение трансгенных мышей с помощью вирусных векторов Jaenish, Mintz
1976 Передача трансгена по наследству Jaenish
1980 Получение трансгенных мышей микроинъекцией Gordon
1981 Получение стволовых клеток Ewans, Kaufman, Martin
1984 Эмбриональные химеры из клеток тератокарциномы Bradley
1985 Получение трансгенных сельскохозяйственных животных Brem, Hammer
1986 Эмбриональные химеры с использованием ЭСК Получение овец посредством пересадки ядер Gossler, Willadsen
1987 Гомологичная рекомбинация в ЭСК Получение КРС методом пересадки ядер Thomas, Capeccha Brather

 

1988 Получение кроликов методом пересадки ядер Slice и Robl
1989 Генный таргетинг у мышей Получение трансгенных мышей и свиней с помощью спермиев в качестве векторов Получение трансгенного КРС методом микроинъекции Получение свиней методом пересадки ядер Thompson el al., Lavitrano el at.,Gandolfi et al. Roschlau el al., Prather et al.,
1995 Получение трансгенного КРС с помощью спермиев Schelander et al
1996 Получение овец методом пересадки ядер культивируемых эмбриональных клеток Получение ЭСК приматов Campbell Thomson
1997 Получение овец методом пересадки ядер фетальных клеток и соматических клеток взрослого животного Получение трансгенных овец методом пересадки ядер трансформированных культивируемых клеток Получение химерных трансгенных свиней, с использованием ПЗК Wilmutetal,   Schnieke   Piedrahita
1998 Получение трансгенного КРС методом пересадки ядер трансформированных фетальных фибробластов Получение трансгенного КРС с использованием псевдотипных ретровирусных векторов Получение ЭСК из бластоцист человека Получение мышей методом инъекции в цитоплазму ядер кумулюсных клеток Получение КРС методом пересадки ядер дифференцированных клеток Cibelli Chan Thomson Wakayama Kato
1999 Получение трансгенных мышей методом коинъекции ооцитов спермиями и экзогенной ДНК Perry
2000 Получение свиней методом пересадки ядер соматических клеток (клетки гранулезы) Polejaeva

 



Дата: 2019-07-24, просмотров: 308.