Микобактерии туберкулеза весьма устойчивы ко многим химическим веществам. Их высокая устойчивость связана со строением клеточной стенки, которая обеспечивает им механическую осмотическую защиту (Ерохин, 1982).

В отношение кислот микобактерии довольно резистентны. Так, в 5-10%-ном растворе соляной и серной кислот они становятся жизнеспособными в течение 24ч. В 5%-ном растворе фенола они не погибают в течение 24 ч. (Благодарный, 1980). Высокой бактерицидностью в отношении микобактерий 1%-ный раствор хлорамина  с добавлением 1%-ного раствора хлористого аммония (Вашков, 1977). 0,5%-ный раствор этостерила убивает микобактерии туберкулеза в течение 30 мин., 5%-ный раствор карболовой кислоты – в течение 5 ч. и 3%-ный раствор лизола – в течение 1ч. Однако, по другим данным, даже 10%-ный раствор лизола убивает микобактерии туберкулеза только в течение 12ч. (Благодарный, 1980).

M.avium сохраняет вирулентность в патологическом материале, хранящемся в 30%-ном растворе глицерина при температуре 5 С в течение 2 месяцев, а выживаемость в течение 3 месяцев.

Довольно быстро микобактерии убивают 50-70% алкоголь (Lindner, 1971). Соление и кипячение лишь незначительно обезвреживает микобактерии.

Возбудители туберкулеза довольно чувствительны к действию кратковолнового УФ излучения, и при облучении их в течение 30с. Погибало 92,3% микобактерий (Шахбанов с соавт., 1972). Возбудитель бычьего вида погибал при инфракрасном электронагреве при температуре 75 С в течение 60с., человеческого и птичьего видов при 77 С – 3с. M.intracellulare при 75 С – 30с. Однако значительно устойчивее к инфракрасному излучению и электронагреву M.scrofulaceum, которая погибла при температуре 75 С только через 5мин. (Позднякова, 1985).

Устойчивость микобактерий к химическим и физическим факторам обусловлена как их видовой принадлежностью, так и условиями в которых они находятся. Атипичные микобактерии пор сравнению с M.bovis и M.avium более устойчивы к 3%-ному щелочному раствору формальдегида и 8%-ной эмульсии феносмолина, особенно M.intracellulare и M.gordonae (Колычев, 1984).

 10. Иммунизирующие свойства микобактерий.

Со времени открытия возбудителя туберкулеза были проведены многочисленные исследования по изучению иммуногенности живых и убитых туберкулезных и атипичных микобактерий.

Иммунопрофилактика туберкулеза с помощью вакцин гетерогенного типа, изготавливаемых из микобактерий, патогенных для холоднокровных, оказалась неэффективной.

Иммунизация животных микобактериями туберкулеза, убитыми физичес - кими или химическими методами (тепло, солнечный свет, хлор, йод, олеиновая кислота, мочевина, ацетоном, бензином и др.), не дала удовлетворительных результатов (Кальметт, 1929).

 При использовании в качестве вакцин возбудителя туберкулеза птичьего, человеческого, мышиного видов микобактерий, выделенных из медяницы, водяной черепахи, а также эмульсии, приготовленной из лимфатических узлов туберкулезных животных, были установлены их иммуногенные свойства.

Вакцина БЦЖ способствует образованию иммунитета у телят, но не обеспечивает надежной защиты от туберкулеза. Кроме того, появление аллергии у вакцинированных животных и отсутствие пригодных для практики методов дифференциации поствакцинальных реакций на туберкулин от постинфекционных затрудняет ее применение.

Как метод борьбы с туберкулезом иммунизацию КРС в ветеринарной практике не проводят (Шишков с соавт., 1986). Некоторые отечественные исследователи рекомендуют использовать вакцину БЦЖ в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий.

Изучение вакцинного штамма микобактерий человеческого вида В-115 показало его высокую остаточную вирулентность. Из штамма «Валле» микобактерий туберкулеза бычьего вида получен новый авирулентный вакцинный штамм «БК - Харьков» (Черкасс, Кандыба, Дикий, 1974).

Изученные иммунизирующие свойства вакцины из штамма БЦЖ, жидкой вакцины «БК – Харьков», жидкой вакцины из штамма В-115 (Вейсфлейер, 1975) и из штамма «К» (Говоров, Кассич с соавт. ,1978) на КРС в экспериментальных и производных условиях. Прививка телят не дала образования иммунитета достаточной напряженности. При контакте с больными коровами телята заболевали туберкулезом.

  11. Диагностика.

Для успешной борьбы с туберкулезом важное значение имеет своевременное выявление больных и зараженных животных. Диагноз на туберкулез у животных устанавливают на основание патологоанатомических, бактериологических, включая биологическую пробу, и аллергическ5их исследований с учетом эпизоотологических данных и клинических признаков болезни. В качестве дополнительных способов при диагностике туберкулеза у животных применяют серологические исследования и симультанную аллергическую пробу.

При проведении бактериологического исследования используют бактериоскопический, культуральный и биологический методы.

 Для исследования необходимы кусочки печени, селезенки, легких и лимфоузлы от убитых или павших животных. При наличии туберкулезных изменений в органах берут пробы из пораженных участков. При пересылке взятый материал консервируют в 30%-ном растворе глицерина. От живых животных исследуют молоко, мокроту, слизь, гной и фекалии.

Для бактериоскопии из материала делают мазки, фиксируют их на пламени, окрашивают по Циль-Нильсену и исследуют под микроскопом. Микобактерии обнаруживаются не в каждом случае, поэтому просматривают100-200 или даже 500 полей зрения.

Иногда в материале, присланном в лабораторию, туберкулезных микобактерий мало и обнаружить их трудно. Тогда прибегают к методам обогащения: центрифугированию либо флотации. Для этого материал измельчают, растирают в ступке, заливают 1%-ным раствором едкого натра, размешивают и переносят в колбу, которую встряхивают 10-15 мин. Затем содержимое центрифугируют 10 мин., надосадочную жидкость сливают и, осадок нейтрализуют кислотой и из него делают мазки. Метод флотации основан на адсорбции углеводородами (ксилолом, бензином, лигроином) микобактерий туберкулеза и всплывании последних вместе с ними. Его используют чаще всего при исследовании молока и мокроты, бронхиальной слизи, экссудата.

Пи исследовании молока 30 мл его наливают в стерильные флаконы с узким горлом емкостью 100 мл и добавляют равное количество 5%-ного раствора едкого натра. Смесь встряхивают в течение 2-3 мин., а затем флаконы ставят в водяную баню при температуре 50-60 С на 1час. Затем к содержимому флакона добавляют 1 мл ксилола, и снова встряхивают в течение 15 мин. в шуттель-аппарате. После встряхивания во флакон добавляют дистиллированную воду, пока его содержимое не поднимется до узкой части горлышка. После отстаивания в течение 1-2 ч. в нем образуется сливкообразное кольцо. 3-4 капли из него наносят пастеровской пипеткой на слегка подогретое предметное стекло. По мере подсыхания наносят на предметное стекло по 3-4 капли еще 2-3 раза, чтобы получить толстый мазок. Мазки высушивают в сушильном шкафу, обезжиривают эфиром, фиксируют на пламени, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют.

 Для получения культур микобактерий материал перед посевом подвергают обработке по методу Гона, Левенштейна-Сумиоши или Аликаевой. При обработке, по Гону, кусочки органов и тканей измельчают и растирают в ступке, затем заливают 3-10%-ным раствором серной кислоты и центрифугируют 10-15 мин. при 3 тыс.оборотов в минуту. Период воздействия кислотой не должен превышать 20-30 мин. Затем надосадочную жидкость сливают, в осадок добавляют несколько капель стерильного физраствора и делают посевы на питательные среды, а также готовят мазки. Применяя метод Левенштейна-Сумиоши, матеал обрабатывают таким же образом, но перед посевом осадок отмывают от серной кислоты 1-2 раза физиологическим раствором с помощью центрифуги. По методу А.П. Аликаевой материал разрезают на кусочки , помещают в ступку и заливают 3-6%-ным раствором серной кислоты на 10-20 мин. Затем кусочки тканей промывают 5 мин. физраствором и растирают.

Для получения культур микобактерий делают посевы на питательные среды (Петраньяни, Гельберга и др.). Каждый материал высевают на 5-10 пробирок о средой. Пробирки заливают расплавленным парафином. Посевы просматривают не реже одного раза в неделю и выдерживают в термостате не менее трех месяцев. В случае отсутствия роста с поверхности среды делают соскоб платиновой петлей, готовят мазок для бактериоскопии и в случае обнаружения в нем микобактерий делают посев на свежую среду.

Для биологического исследования используют тот же материал, который был приготовлен для посева, а наличие в нем серной кислоты нейтрализуют 10%-ным раствором двууглекислой соды.

Заражают кроликов, трех морских свинок, а при необходимости трех кур и ведут за ними наблюдение.

 12. Дифференциальная диагностика.

Микобактерии различаются между собой по скорости и характеру роста на питательных средах, по морфологии, по патогенности и другим свойствам. Раньше определение вида их называли типированием, поскольку они делились на типы. Для определения вида микобактерий туберкулеза предложено немало методов: бактериоскопический, культуральный, биохимический и тд.

Для определения вида чаще всего используют биологический метод. С этой целью ставят биопробу на трех морских свинках и трех кроликах, а если необходимо, тои на трех курах. Культуру микобактерий вводят животным в дозе 1мг сырой бактериальной массы, суспендированной в 1мл стерильного физиологического раствора, морским свинкам подкожно в области паха, кроликам – внутривенно в краевую вену уха, курам – в подкрыльцевую вену. У морских свинок при развитии туберкулезного процесса через 2-4 недели на месте введения культуры образуется язва, а также увеличение и уплотнение регионарного лимфатического узла. Свинки прогрессивно худеют. У кроликов и кур при развитии туберкулеза наблюдают истощение и снижение аппетита. Кур исследуют туберкулином. Через три месяца морских свинок, кур и кроликов убивают, вскрывают и проводят бактериологическое исследование паренхиматозных органов.

Принадлежность исследуемой культуры к тому или иному виду определяют по таким данным:

- при генерализованном процессе у морских свинок и кроликов – M.bovis;

- при генерализованном процесс6е у морских свинок, а у кроликов отсутствие поражения или единичные очажки в легких – M. Tuberculosis;

- при генерализованном процессе у кур и сепсисе у кроликов – M.avium.

 М.М. Иванов и Л.В. Кириллов предложил для определения M.avium исследуемую культуру вводить двум курам внутрикожно в бородку в дозе 0,1 мг. На месте введения M.avium вызывают припухлость, а к 25 – 30-му дню язву. Иногда наблюдается перфорация бородки.

Серодиагностика. Для этой цели изучали реакции преципитации, агглютинации, диффузной преципитации, связывания комплемента, гемагглютинация и гемолиза. Реакция преципитации и реакция агглютинации у млекопитающих животных оказались неэффективными. Лишь у кур кровокапельная реакция агглютинации дала обнадеживающие результаты.

Наиболее изучена реакция связывания комплемента (РСК). Ее применяют как дополнительный метод при отборе животных для диагностического убоя среди реагирующих на туберкулин. В РСК большую роль играет качество антигена. Лучшим из них ранее считали метиловый антиген Негр и Бокэ. В последние годы более эффективны были признаны сложносмешанный антиген Т.А. Луценко и комплексный антиген Ю.Я.Кассича. В основу сложносмешанного антигена был взят полисахаридный комплекс, полученный из микобактерий туберкулеза. В состав комплексного антигена Ю.Я. Кассича входит полисахаридный комплекс, метиленовый экстракт туберкулезных микобактерий и водный экстракт легочной ткани здорового крупного рогатого скота.

Для постановки реакции исследуемые сыворотки инактивируют в водяной бане при 60 С в течение 30мин. Антиген и комплемент титруют. В пробирки разливают испытуемые сыворотки в разведениях: 1:5, 1:10, 1:20, 1:40 и 1:80 по 0,25мл и добавляют антиген и комплемент тоже по 0,25мл. Затем штативы с пробирками ставят на 30мин. в водяную баню при 37 – 38 С, потом вынимают и добавляют в каждую пробирку гемолитическую систему, которая состоит из 0,25мо 2%-ной взвеси эритроцитов барана и 0,25мл гемолизина в рабочем титре. Затем штативы снова помещают в водяную баню на 15мин. Реакцию учитывают предварительно после бани и окончательно через 16-18 часов. Оценку производят по задержке гемолиза. Получение положительной РСК в титре 1:20 и выше указывает на наличие у животного туберкулезного процесса.

Реакцию гемагглютинации предложил Мидлбрук и Дюбо. Сущность ее заключается в Ом, что антиген, содержащийся в вытяжках микобактерий, обладает способностью адсорбироваться на поверхности эритроцитов и сенсибилизировать их к сыворотке крови туберкулезных животных, которая вызывает агглютинацию таких эритроцитов.

Реакция гемолиза заключается в том, что после учета реакции гемагглютинации в каждую пробирку добавляют комплемент. В пробирках, где содержалась сыворотка туберкулезных животных, наступает гемолиз.

Аллергическая диагностика. У животных, зараженных туберкулезом, через 15-20 дней появляется аллергия, что выражается повышением чувствительности к продуктам жизнедеятельности микобактерий (токсинам).

На протяжении многих лет для аллергической диагностики применяли только альттуберкулин Коха. В настоящее время у млекопитающих животных и птиц применяют альттуберкулин и сухой очищенный туберкулин (ППД – протеин пурифиед дериват).

Альттуберкулин готовят на биофабриках, выращивая культуры микобактерий туберкулеза бычьего и человеческого вида на мясо – пептонном глицериновом бульоне в течение 6-8 недель, после чего культуру взбалтывают и стерилизуют в автоклаве при 120 С 30мин., а затем выпаривают при 80-90 С до 1/10 первоначального объема, отстаивают и фильтруют через фильтр Зейтца. Полученный таким образом туберкулин прозрачен, коричневого цвета, имеет специфический запах. Он содержит около 40-50% глицерина.

ППД готовят, выращивая культуры микобактерий туберкулеза на синтетической среде. В фильтрат 8-недельной культуры добавляют трихлоруксусную кислоту для осаждения протеинов. Осадок обрабатывают, очищая от следов этой кислоты и высушивают. Полученный препарат представляет собой аморфную массу светло коричневого цвета с сероватым оттенком. К сухому очищенному туберкулину биофабрики выпускают растворитель, который представляет собой бесцветную прозрачную жидкость с легкой опалесценцией. Туберкулин и растворитель выпускают в ампулах и флаконах.

Применяют туберкулин для внутрикожной и глазной пробы.

Для внутрикожной туберкулинизации млекопитающих животных (кроме свиней и обезьян) применяют сухой очищенный туберкулин либо альттуберкулин для млекопитающих, для свиней – одновременно сухие очищенные туберкулины для млекопитающих и птиц, птицам – сухой очищенный туберкулин для птиц. Учитывают реакцию у КРС, буйволов, верблюдов через 72ч. после введения препарата, у коз, свиней, собак, пушных зверей через 48ч., а у птиц через – 30-36ч. у животных реакция на месте введения туберкулина проявляется в виде разлитого отека тестоватой или мягкой консистенции, не имеющей, как правило, четких границ с окружающей тканью. Что сопровождается местным повышением температуры, а иногда болезненностью. При учете реакции место введения препарата пальпируют, а при обнаружении изменения толщину кожной складки измеряют кутиметром, сравнивая ее с толщиной складки неизмененной кожи вблизи места введения туберкулина. Крупный рогатый скот, верблюдов и оленей считают реагирующими на туберкулез при утолщении кожной складки на 3мм и более; коз, овец, собак, свиней, пушных зверей, кур – при образовании припухлости в месте введения туберкулина, норок – при опухании века.

Глазную туберкулинизацию (офтальмопробу) применяют у лошадей. А иногда у крупного рогатого скота одновременно с внутрикожной пробой. Ее проводят двукратно с интервалом в 5-6 дней. Глазной пипеткой на конъюнктиву нижнего века наносят 3-5 капель туберкулина. Учитывают реакцию через 6, 9, 12, 24ч. после первого и через 3, 6, 9, 12ч. после второго введения. Реакция выражается в выделении слизисто-гнойного или гнойного секрета и гиперемии конъюнктивы.

Эпизоотологический метод. При подозрении на заболевание животного туберкулезом проводят эпизоотологическое обследование. При этом обобщают и анализируют статистические данные ветеринарной отчетности о туберкулезе крупного рогатого скота и других видов животных не менее чем за пять лет. Учитывают данные боенской статистики. Выясняют когда и по каким ветеринарным документам поступили в хозяйство животные, условия их размещения в карантине, дату и результаты исследования в период профилактического карантина; возможность контакта животных этого хозяйства на пастбищах, водоемах и скотопрогонных трактах с животными неблагополучных хозяйств. Возбудитель туберкулеза может быть занесен в благополучные стада с необеззараженным обратом, доставленным с молочного завода, куда поступило молоко из неблагополучной фермы. При этом заболевание обычно регистрируют у телят.

Человек также может заражать крупный рогатый скот возбудителем туберкулеза бычьего вида, если он сам болеет туберкулезом, вызванным бактериями этого вида. Возбудитель туберкулеза человеческого вида сенсибилизирует КРС к туберкулину и лишь изредка вызывает ограниченные изменения, преимущественно в лимфатических узлах, регионарных местам проникновения микобактерий в организм животного. У свиней при заражении этим видом микобактерий обнаруживают патологоанатомические изменения, характерные для туберкулеза. Поэтому выясняют также наличие больных туберкулезом людей, работающих на ферме. Анализ этих данных способствует своевременному установлению диагноза.

Клинический метод. Течение туберкулеза у животных обычно хроническое, с постоянно нарастающими симптомами. С момента заражения до появления признаков болезни может пройти несколько месяцев или лет. Клинические признаки туберкулеза у животных не всегда типичны. У одних больных животных они могут вообще отсутствовать, у других наблюдаются неяркие симптомы, по которым можно лишь подозревать заболевание туберкулез.

При нормальных условиях кормления и содержания туберкулез у крупного рогато скота может протекать без видимых клинических признаков. Они проявляются только при далеко зашедшем патологическом процессе. Чаще поражаются легкие, кишечник, вымя, а также подчелюстные, заглоточные, околоушные, бронхиальные, брыжеечные и другие лимфатические узлы. Каким бы путем не возникло заболевание, оно поначалу носит ограниченный характер в виде мелких очагов, преимущественно в легких. При легочной форме сначала повышается температура (40 С), появляется резкий короткий сильный кашель (особенно по утрам), который потом становится слабым, частым и сопровождается болями. Больные животные постепенно худеют, стоят сгорбленно, понуро опустив голову; передвигаются с трудом, редко ложатся, поднимаются со стоном. Шерстный покров взъерошен, теряет блеск, кожа теряет эластичность. Через рот и носовые отверстия иногда выделяется слизисто – гнойное истечение. Если поражена плевра, то животное ощущает боль при надавливании между ребрами.

Подчелюстные и заглоточные лимфатические узлы увеличиваются в размерах, становятся болезненными, малоподвижными. Кожа над ними постепенно истончается и, при прогрессировании болезни,

лимфатические узлы расплавляются, а образующийся в них гной прорывается наружу и длительное время выделяется через свищи.

Туберкулез кишечника протекает хронически и сопровождается прогрессирующим исхуданием и перемежающимися поносами, неподдающимися лечению.

Поражение вымени характеризуется местным процессом с поражением одной или обеих задних долей, иногда передних. Пораженная доля увеличена, диффузно или гнездно уплотнена. В глубине железистой ткани после сдаивания молока прощупываются туберкулезные очаги разной величины и консистенции. Надвымянные лимфатические узлы увеличены до размера куриного яйца, на ощупь плотные бугристые.

Поражение матки и яичников сопровождается абортами, яловостью.

 Болезнь может протекать генерализованно, т.е. с поражением многих органов и лимфатических узлов.

Больные куры становятся вялыми, худеют. Бледнеет и сморщивается гребень. Птицы малоподвижны, яйценоскость снижается, грудные мышцы атрофируются. Генерализация процесса сопровождается поражением кишечного тракта. Отмечают понос, вызывающий резкое истощение птиц, иногда поражаются кости, суставы, развивается хромота. 

Клиническое проявление болезни у других видов животных недостаточно характерно.

Из клинических методов диагностики при туберкулезе применяют осмотр, пальпацию, перкуссию, аускультацию и термометрию.

При осмотре определяют упитанность животного, состояние кожи, лимфатических узлов, слизистых оболочек, количество дыхательных движений, их ритм, силу и симметричность, тип дыхания. Также исследуют прием корма и питья. Полость рта, глотки. Кишечник, акт дефекации экскременты.

Пальпацией устанавливают повышенную чувствительность гортани и грудной клетки. С помощью аускультации определяют состояние легких, желудка и кишечника. Перкуссией выявляют физическое состояние легких и плевры.

Осмотр проводят при дневном свете, чаще утром, когда животные поднимаются. При расстройстве тех или иных функций необходимо исследовать соответствующие системы организма. При наличии плохого аппетита, отсутствии жвачки или, наоборот, при длительных поносах особое внимание обращают на органы пищеварения, а при наличии кашля, истечений из носа – на дыхательную систему.

В начале заболевания перкуссия и аускультация не дают отклонений от нормы. С развитием процесса при аускультации слышны хрипы, ослабленное везикулярное дыхание или дыхательные шумы на отдельных участках легкого не прослушиваются совсем. Перкуссией обнаруживают очаги притупления.

При надавливании или перкуссии грудной клетки животные стараются отклониться и кашляют; шум трения плевры указывает на шероховатость плевральных листков или наличие жемчужных узлов.

Нормальная температура тела у крупного рогатого скота колеблется в пределах 37,5 – 39,5 С . по мере развития болезни температура временами повышается на 0,5 – 1,5 С.

Большое диагностическое значение имеет исследование лимфатических узлов методами осмотра и пальпации. При этом следует учитывать, что размер лимфатических узлов значительно колеблется в зависимости от размера и возраста животного. При исследовании обращают внимание на величину, строение, форму, консистенцию, температуру кожи, покрывающей узел, чувствительность, четкость отграничения от окружающих тканей, подвижность самого узла и находящейся под ним кожи.   

У крупного рогатого скота легко прощупываются подчелюстные, предлопаточные, коленной складки, надвымянные, околоушные и заглоточные лимфатические узлы. При прощупывании подчелюстных лимфатических узлов одной рукой животное удерживают за рог, а другой пальпируют, предлопаточных – становятся рядом с шеей животного, лицом к задней части его тела, и, охватив шею обеими руками, просовывают пальцы под передний край лопатки. Надвымянные лимфатические узлы пальпируют после сдаивания молока обеими  руками, стоя сзади животного и захватив пальцами справа и слева задние доли вымени в верхней трети последнего и постепенно пропуская их между пальцами. При туберкулезе лимфатические узлы обычно бугристые, плотные, безболезненные и малочувствительные и обыкновенно не сросшейся с находящейся над ними кожей. Иногда они достигают опухоли величиной почти с кулак и более, обычно малоподвижны, круглой или яйцевидной формы.

В некоторых случаях при переходе патологического процесса на серозный покров внутренних половых органов у коров повышается половая возбудимость, вследствие чего у них ежемесячно или с меньшими промежутками проявляются симптомы охоты. В позднейшей стадии болезни половое возбуждение становится почти беспрерывным («нимфомания»).

На плановом проведении профилактических и оздоровительных мероприятий можно предотвратить развитие клинических признаков туберкулеза у крупного рогатого скота, заразившегося возбудителем туберкулеза бычьего вида. Клинически больных животных чаще выявляют в стадах хозяйств, длительно неблагополучных по туберкулезу. Необходимо учитывать, клинически больные животные нередко находятся в состоянии анергии и на туберкулин не реагируют. Поэтому в неблагополучных по туберкулезу хозяйствах одновременно с туберкулинизацией необходимо проводить клиническое обследование животных.