Настоящий документ устанавливает методику определения интегральной токсичности поверхностных, в том числе морских, грунтовых, питьевых, сточных вод, водных экстрактов из объектов окружающей среды (почва, отходы производства и потребления, осадки сточных вод) в лабораторных и полевых условиях с использованием измерительного прибора «Биотокс-10» и тест-объекта «Эколюм».

ПРИНЦИП МЕТОДИКИ

В качестве тест-объекта используется препарат лиофилизированных люминесцентных бактерий «Эколюм» или бесклеточного экстракта из этих бактерий. Методика основана на определении изменения интенсивности биолюминесценции бактерий при воздействии химических веществ, присутствующих в анализируемой пробе, по сравнению с контролем. Уменьшение интенсивности биолюминесценции пропорционально токсическому эффекту.

Острое токсическое действие исследуемой пробы на препарат «Эколюм» определяется по гашению интенсивности биолюминесценции за 5 - 30-ти минутный период экспозиции.

Количественные оценки тест-реакции выражаются в виде безразмерной величины - индекса токсичности «Т» и функциональными токсикологическими параметрами ЕС20 и ЕС50.

Индекс токсичности «Т», равный отношению Т = 100(Iо - I)/Iо, где Iо и I соответственно интенсивность биолюминесценции контроля и опыта при фиксированном времени экспозиции исследуемой пробы с бактериями.

Методика допускает три пороговых уровня индекса токсичности:

1) допустимая степень токсичности образца: индекс токсичности Т меньше 20;

2) образец токсичен: индекс Т равен или больше 20 и меньше 50;

3) образец сильно токсичен: индекс токсичности Т равен или более 50.

Ряд проб вызывает активацию свечения тест-системы и регистрируется отрицательное значение индекса токсичности. В таком случае индекс Т принимается равным нулю.

Токсикологические параметры пробы ЕС20 и ЕС50, определяемые также посредством измерения Iо и I, позволяют быстро и экономно выяснить вопрос, при каких объемах исходного слабо токсического образца достигается установленный предел токсичности (ЕС20 и/или ЕС50) или при каких разведениях сильно токсический образец станет безопасным (величины менее ЕС20).

ЕС50 - эффективный объем образца (в опытах с чистым химическим соединением - концентрация), вызывающий тушение свечения биосенсора на 50 % по сравнению с контролем. В этом случае образец сильно токсичен (индекс токсичности равен 50). ЕС20 - эффективный объем образца, (в опытах с чистым химическим соединением - концентрация) который приводит к 20 %-ному тушению свечения биосенсора по сравнению с контролем. В этом случае образец токсичен (индекс токсичности равен 20). Все значения величин менее ЕС20 свидетельствуют о том, что образец безвреден для человека.

Вычисление величин ЕС проводят с использованием гамма-функции (G), представляющей собой зависимость отношения потери интенсивности свечения пробы к оставшейся интенсивности свечения пробы и описывается формулой G = (Io - I)/I, где Iо и I соответственно интенсивность биолюминесценции в контроле и опыте. Люминометр «Биотокс-10» автоматически вычисляет величину индекса токсичности, параметров ЕС20 и ЕС50 и погрешность измерения.

ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТИ

Методика выполнения измерений обеспечивает получение результатов измерений с погрешностью, не превышающей значений:

2.1 Показатель точности - |Δ_н| = |Δ_в| = Δ - границы, в которых находится погрешность методики составляет ±0,30Т при вероятности Р = 0,95.

2.2 Показатель повторяемости - σ_r - среднее квадратическое отклонение результатов определений, полученных по методике в условиях повторяемости составляет 0,07Т.

23 Показатель воспроизводимости - σ_R - среднее квадратическое отклонение результатов измерений, полученных по методике в условиях воспроизводимости составляет 0,15Т.

2.4 Предел повторяемости - r - допускаемое расхождение между тремя результатами параллельных определений - составляет 0,23Т при вероятности 0,95.

2.5 Предел воспроизводимости - R - допускаемое расхождение между двумя результатами, полученными в разных лабораториях -составляет 0,42 Т при вероятности 0,95.

2.6 Значения показателя точности методики используют при:

- оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;

- оценке деятельности лабораторий на качество проведения испытаний;

- оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики выполнения измерений в конкретной лаборатории.