Изучение культуральных свойств колоний. За развитием культуры микромицетов наблюдают в течение нескольких дней и даже двух недель с интервалом 3-4 суток. При описании культуральных признаков грибов отмечают: - скорость роста колоний (быстро растущие или медленно растущие);

· внешний вид колонии;

· текстуру колонии (бархатистая, пушистая, шерстистая, шероховатая, войлочная);

· окраску колонии субстратного и воздушного мицелия;

· диффузию пигмента в агар;

· размер.

· складчатость колонии;

· наличие экссудата и его цвет;

· запах культуры.

Характер роста на плотной питательной среде у многих не родственных грибов может быть практически идентичным, поэтому макроскопическую морфологию рассматривают, как дополнительный, хотя и важный признак для идентификации.

Основой идентификации мицелиальных грибов является выявление микроскопических спороносных структур.

Микроскопия в чашках Петри. Для характеристики морфологических признаков культуры грибов молодые 3-4-суточные колонии грибов, выращенные на среде сусло-агар, агар Чапека и т.п. (кроме агаровой среды Сабуро) рассматривают непосредственно в чашках Петри. При этом не нарушается строение органов спороношения, которые хорошо различимы даже при микроскопировании с объективом х 8. Следует соблюдать правила техники безопасности при работе с микроорганизмами.

Микроскопия в препарате «раздавленная капля». Для более детального знакомства с особенностями строения разных видов грибов готовят препараты «раздавленная» капля.

Техника микроскопирования мицелиальных грибов в препарате «раздавленная капля». Двумя препаровальными иглами или крючками, предварительно профламбированными в пламени горелки, отделяют от питательной среды часть грибной колонии и помещают её в каплю водного раствора глицерина (1:4). На предметном стекле мицелий расправляют и накрывают препарат покровным стеклом. При изготовлении препарата мукоровых грибов иглами захватывают только воздушный мицелий, не касаясь питательной среды. Аккуратно переносят кусочек мицелия в каплю раствора и накрывают покровным стеклом. Предметные стекла рекомендуется подогреть до легкого закипания воды. Вместо водного раствора глицерина исследуемый препарат можно помещать в каплю воды, к которой добавляют этиловый спирт 1:1 или концентрированную уксусную кислоту, поскольку споры грибов не смачиваются водой. Иногда используют специальную жидкость следующего состава: карболовая кислота кристаллическая - 20 г, глицерин - 40 мл, дистиллированная вода - 20 мл.

При определении видовой принадлежности грибов родов Penicillium и

Aspergillus пользуются препаратами, приготовленными в капле смеси глицерина с водой, рассматривая их с объективом х40. На таком препарате можно рассмотреть стеригмы на конце конидиеносца у грибов рода Aspergillus, строение «метелки» грибов рода Penicillium, характер расположения фиалид на стеригме и другие признаки. Применяя иммерсию (объектив х 90), можно исследовать еще более мелкие детали строения разных видов грибов.

Для прижизненной окраски грибов используют как основные (генциановый фиолетовый, метиленовый синий, сафранин, нейтральный красный, метиленовый фиолетовый), так и кислые (эритрозин) краски в концентрации 1:500, 1:1000, 1:10000.

Изучение органов спороношения у грибов рода Fusarium и многих других целесообразно проводить, пользуясь методом микрокультур так как грибы часто дают хорошее спороношение в условиях истощения питательного субстрата.

Метод микрокультур на агаризованных предметных стёклах. Таким методом можно наблюдать развитие мицелия и спорогенез. Стерильной расплавленной средой покрывают предметные стекла и помещают в чашку Петри и на П-образную стеклянную подставку. Посев гриба производят штрихом по длинной стороне стекла. Штрихи покрывают стерильными покровными стеклами так, чтобы под ними не оставалось пузырьков воздуха. Во избежание пересыхания агара в чашку наливают на дно стерильную воду. Через 6-8 дней инкубации при 25° стекла вынимают и, очистив нижнюю сторону от агара, микроскопируют.

Метод микрокультур на покровном стекле. Мицелий со спороношениями удобно рассматривать, приготовив препарат следующим образом: небольшой кусочек питательной среды помещают на стерильное предметное стекло, инфицируют грибной культурой, покрывают покровным стеклом и инкубируют 2-3 суток; затем снимают покровное стекло, кладут его на предметное, закрывают новым покровным стеклом и микроскопируют.