(витамина С) (по С.М. Прокошеву)

Теоретическое обоснование. Аскорбиновая кислота широко распространена в растениях. Ею богаты плоды шиповника, черная смородина, капуста, хвоя, хрен, петрушка. При недостатке витамина С в продуктах питания у людей развивается цинга. Важная роль аскорбиновой кислоты связана с ее участием в окислительно-восстановительных процессах и, в первую очередь, в дыхании. Аскорбиновая кислота физиологически активна, хорошо растворима в воде, однако легко разрушается в воде, растворах щелочей, особенно в присутствии воздуха, света, следов железа и меди. При подкислении среды она хорошо сохраняется.

Аскорбиновая кислота и ее дегидроформа образует окислительно-восстановительную систему, которая может, как отдавать, так и принимать водородные атомы. Содержание витамина С является пока­зателем восстановительной и общей физиологической активности рас­тительных тканей.

На окислительно-восстановительных свойствах этого соединения основан и метод определения. Используется при этом индикатор Тильманса (2,6-дихлорфенолиндофенол), который восстанавливается в бесцветное соединение экстрактами растений, содержащими аскорбиновую кислоту. Вытяжку из растений титруют рас­твором индикатора до появления розового окрашивания.

Цель работы. Определить количество аскорбиновой кислоты в различных плодах и овощах в процессе их хранения.

Объект: плоды лимона, айвы, яблоки, листья свежей капусты, капуста квашенная, клубни картофеля, луковица лука, корнеплод брюквы и т.д. (данная методика позволяет определять содержание витамина С в частях растений, имеющих неокрашенный клеточный сок).

Реактивы и оборудование: аскорбиновая кислота кристаллическая, 1 % раствор HCl, 1 % раствор щавелевой кислоты, 2 % раствор Н₂SО₄, 1 % раствор крахмала, КJ, 0,001 н раствор КJО₃, раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола, весы с разновесами, терка пластмассовая, фарфоровая ступка с пестиком, мерный цилиндр на 10 мл, кварцевый песок, воронка, фильтр, стеклянная палочка, фильтровальная бумага, мерные колбы на 50, 100 мл, коническая колба на 50 мл (2 шт.), пробка, бюретка, бюксы (2 шт.).

Ход работы:

1. Исследуемый материал грубо измельчить ножом из нержавеющей стали. Процесс измельчения выполнить быстро. Отвесить 10 г, перенести в фарфоровую ступку.

2. Залить навеску 5 мл 1 % НСl и тщательно растереть, добавляя кварцевый песок, до однородной массы. Во время растирания прилить еще 15 мл 1 % раствора НСl. Полученную смесь перенести из ступки в мерную колбу на 100 мл (через воронку по стеклянной палочке). Ополаскивают ступку и пестик насколько раз 1 % щавелевой кислотой, которую тоже сливают в мерную колбу и той же кислотой доводят объем жидкости в колбе до метки. Соляная кислота применяется для извлечения из растительной ткани, как свободной, так и связанной аскорбиновой кислоты, щавелевая кислота осаждает белки и повышает стойкость аскорбиновой кислоты.

3. Колбу закрыть пробкой, тщательно перемешать и отставить на 5 минут. По истечении этого времени содержимое колбы отфильтро­вать через сухой фильтр.

4. Отобрать мерным цилиндром в два бюкса по 10 мл полученного фильтрата и оттитровать каждую из двух проб из бюретки раствором краски 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розового окрашивания, не исчезающего в течение 0,5 - 1 минуты.

5. Установить титр краски 2,6-дихлорфенолиндофенола: растворить насколько кристаллов аскорбиновой кислоты в 50 мл 2 % серной кислоты. 5 мл этого раствора оттитровать краской из микробюретки. Такой же объем раствора аскорбиновой кислоты оттитровать из дру­гой бюретки 0,001 н раствором КJО₃. Во втором случае перед титрованием к раствору аскорбиновой кислоты прибавить 2-3 кристал­лика КJ и 5 капель 1 % крахмального клейстера. Прибавление большего количества йодистого калия задерживает окисление аскорбиновой кислоты. Титрование вести до появления бледно-голубой окраски. Титр краски вычислить по формуле:

                                          Т = 0,088 ·а ,                                          

в

где    а – количество 0,00 I н раствора КJО₃, пошедшего на титрование         

     аскорбиновой кислоты, мл;

в – количество раствора краски пошедшего на титрование                 

     аскорбиновой кислоты, мл;

0,088 – количество мг аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл    

        0,001н раствора КJО₃.

Так как не исключена возможность присутствия в растительных вытяжках посторонних редуцирующих веществ, реагирующих с красителем и, следовательно, повышающих результаты анализа, то при необходимости производить особенно точные анализы следует принимать в расчет и эти вещества. Для этого к двум другим порциям по 10 мл исследуемой вытяжки прибавляют 0,1 мл 10 %-го раствора CuSO₄ и нагревают в течение 10 мин при 110 °С (на глицериновой бане или в термостате). В присутствии меди в этих условиях аскорбиновая кислота разрушается полностью. Охлаждают и титруют краской. Полученную поправку вычитают из данных титрования опытных растворов.

6. Содержание аскорбиновой кислоты (Х) в мг на 100 г исследуемого материала (мг %) вычислить по формуле:

                                       Х = 100 · а ·Т · V,                                    

                                                       В · С

где    а – количество краски, пошедшей на титрование фильтрата, мл;

Т – миллиграмм-титр краски по аскорбиновой кислоте,  мг;

V– объем полученной вытяжки из данной навески, мл;

В – количество фильтрата, взятого для титрования, мл;

С – навеска исследуемого растительного материала, г.

7. Сравнить различные объекты по содержанию витамина С. Сделать вывод.