Концентрацию определяемого вещества в анализируемом растворе находят на основании результатов фотометрических измерений различными способами.

Метод градуированного графика (метод калибровочных кривых). По результатам измерения оптической плотности А пяти-шести эталонных растворов с различной точно известной концентрацией с при аналитической длине волны строят градуировочный график в координатах А — с (рис. 2).

Рис. 2. Градуировочный график, построенный на основании фотометрических измерений.

Измеряют оптическую плотность А_х анализируемого раствора'в тех же условиях, в которых измеряли оптическую плотность эталонных растворов (кювета, аналитическая длина волны, раствор сравнения). По найденному значению А_х находят концентрацию с_х определяемого вещества на градуировочном графике (рис. 2).

Графический способ нахождения концентрации применим и тогда, когда наблюдаются кажущиеся отклонения от основного закона светопоглощения.

Метод одного стандарта. Данный метод применим тогда, когда выполняется закон светопоглощения. Сущность метода состоит в следующем. Готовят стандарт (стандартный раствор) — раствор с точно известной концентрацией определяемого вещества с(ст) — и измеряют его оптическую плотность А(ст) при аналитической длине волны по отношению к раствору сравнения. Затем в той же кювете и в тех же условиях измеряют оптическую плотность А(х) анализируемого раствора с неизвестной концентрацией с(х) определяемого вещества. При условии выполнимости основного закона светопоглощения имеем:

А(ст) = eс(ст)l,

А(х) = eс(х)l,

откуда

Определение концентрации по молярному или удельному коэффициенту погашения. Метод применим при условии выполнимости основного закона светопоглощения. Численное значение молярного е или удельного Е коэффициента погашения должно быть известно. Если оно неизвестно, то определяют среднее значение е или Е экспериментально, проведя фотометрические измерения оптической плотности эталонных растворов с точно известной концентрацией определяемого вещества при аналитической длине волны.

Измеряют оптическую плотность А(х) анализируемого раствора с искомой концентрацией с(х) определяемого вещества при аналитической длине волны в кювете с толщиной поглощающего слоя l. По измеренному значению A(х) рассчитывают концентрацию с(х), исходя из основного закона светопоглощения:

А(х) = eс(х)l,  с(х) = А(х) / el,

или

А(х) = EW(х)l, W(x) = А(х) / Еl,

где концентрация с(х) выражена в единицах моль/л, а концентрация W(х) — в г/100 мл раствора.

Метод добавок стандарта. Метод применим, если выполняется основной закон светопоглощения.

Готовят два раствора: первый — анализируемый раствор с искомой концентрацией с(х) определяемого вещества и второй — анализируемый раствор, к которому прибавили точно известное количество (добавка стандарта) определяемого вещества, так что его концентрация во втором растворе равна с(х) + с, где с — точно известное увеличение концентрации за счет прибавления добавки стандарта.

Измеряют последовательно оптическую плотность А₁, и А₂ соответственно первого и второго растворов в одной и той же кювете при аналитической длине волны. С учетом выполнимости основного закона светопоглощения можно написать

А₁ = eс(х)l,

А₂ = e[с(х) + с]l,

откуда

Определение концентрации нескольких веществ при их совместном присутствии. В основе метода лежит закон аддитивности оптической плотности при соблюдении основного закона светопоглощения.

Пусть в анализируемом растворе одновременно присутствуют два вещества — компонент 1 и компонент 2, не вступающие в химическое взаимодействие друг с другом. Компонент 1 имеет в спектре поглощения полосу с максимумом при длине волны l₁ а компонент 2 — полосу с максимумом при длине волны l₂. Обе полосы частично налагаются друг на друга, так что суммарное светопоглощение раствора при обеих длинах волн складывается из светопоглощения обоих компонентов (рис. 3).

Пусть оптическая плотность раствора, измеренная при длинах волн l₁ и l₂ в кювете с толщиной поглощающего слоя l, равна А₁ и А₂ соответственно (рис. 3).

Рис. 3. Спектр поглощения двух веществ при их совместном присутствии: 1 – полоса поглощения компонента 1; 2 — полоса поглощения компонента 2; 3 — суммарный спектр поглощения раствора

Согласно закону аддитивности оптической плотности (8.6) можно написать

где  и  — соответственно молярные коэффициенты погашения компонентов 1 и 2 при длине волны l₁;  и  — соответственно молярные коэффициенты погашения компонентов 1 и 2 при длине волны l₂; с₁ и с₂ — концентрация соответственно компонента 1 и компонента 2 в анализируемом растворе.

Решая эти два уравнения с двумя неизвестными с₁ и с₂, можно определить обе концентрации:

Аналогично можно провести измерения и расчеты и в тех случаях, когда в анализируемом растворе одновременно присутствуют более двух определяемых веществ. Рассматриваемым методом можно определять медь, кобальт и никель при их совместном присутствии в виде комплексонатов фотометрированием раствора при трех длинах волн (436; 367 и 328 нм); амидопирин и кофеин — при 272 и 255 нм; дикаин и новокаин — при 311 и 290 нм и т.д. [2]